Новый подход к оценке эффективности антигельминтных средств in vitro

Abstract

Цель. Разработать новый метод определения жизнеспособности описторхов in vitro с использованием MTS-реактива и оценить его применимость для анализа эффективности антигельминтных средств при лечении описторхоза. Материалы и методы. Для создания модели инвазии O. felineus использовались золотистые сирийские хомяки. Животные инфицировались метацеркариями, полученными из рыб семейства карповых. Спустя 3 мес после заражения взрослые особи паразитов (мариты) извлеклись из гепатобилиарной системы. Жизнеспособность марит оценивалась с помощью шкалы подвижности и нового метода, основанного на модификации протокола MTS-теста. Для учета различий между размерами и количеством клеток марит результаты были нормализованы относительно содержания белка. Для оценки возможности применения нового подхода в изучении противоописторхозной фармакологической активности проверена жизнеспособность марит в присутствии празиквантела. Результаты. При инкубации марит описторхов в среде с добавлением МТS-реактива происходит накопление окрашенного водорастворимого формазана. Термическое инактивирование паразитов значительно снижает продукцию этого соединения. Так как исследуемые мариты различались по размеру и количеству клеток, полученные данные об их жизнеспособности были нормированы на содержание белка. Результаты коррелируют с данными о жизнеспособности паразитов, полученными традиционным методом с использованием шкалы подвижности. Оценка эффективности празиквантела в разных концентрациях с помощью двух независимых методов (МТS-тест и шкала подвижности) показала, что результаты MTS-теста согласуются с литературными данными и сопоставимы с результатами, полученными с использованием шкалы подвижности. Заключение. Разработан новый метод оценки противоописторхозной активности лекарственных препаратов in vitrо, основанный на оценке продукции водорастворимого формазана маритами O. felineus в среде культивирования с использованием MTS-реагента для скрининга противоописторхозной активности новых антигельминтных препаратов.Aim. To develop a new method to determine the viability of Opisthorchis felineus in vitro using the MTS reagent and to evaluate its applicability for analyzing the efficacy of anthelmintic agents in the treatment of opisthorchiasis. Materials and methods. Golden hamsters were used to create a model of O. felineus infection. The animals were infected with metacercariae obtained from fish of the Cyprinidae family. Three months after infection, adult parasites were extracted from the hepatobiliary system. Their viability was assessed using the motility scale and a new method based on the modified MTS test protocol. To account for differences between the size and number of adult parasite cells, the results were normalized with respect to protein content. To evaluate the feasibility of the new approach in the study of pharmacological activity against opisthorchiasis, the viability of adult parasites in the presence of praziquantel was tested. Results. During incubation of adult flukes in a medium with the addition of the MTS reagent, colored watersoluble formazan was accumulated. Thermal inactivation of parasites significantly decreased the production of this compound. Since the studied adult parasites differed in size and number of cells, the obtained data on their viability were normalized to protein content. The results correlated with the data on parasite viability obtained by the traditional method using the motility scale. Evaluation of praziquantel efficacy at different concentrations using two independent methods (the MTS test and the motility scale) showed that the results of the MTS test were consistent with literature data and comparable with the results obtained using the motility scale. Conclusion. A new method for in vitro evaluation of anti-opisthorchiasis activity of drugs was developed. It is based on the assessment of water-soluble formazan production by adult O. felineus flukes in the culture medium using the MTS reagent for screening anti-opisthorchiasis activity of new anthelmintic drugs.