Гиполипидемическое действие сесквитерпенового гамма-лактона ахиллина на клеточной культуре крысиной гепатомы

Abstract

Цель исследования - оценить in vitro фармакологические эффекты сесквитерпенового γ-лактона ахиллина в качестве потенциального гиполипидемического средства. Материал и методы. Изучено влияние сесквитерпенового гамма-лактона ахиллина и гемфиброзила (препарат сравнения) на содержание липидов в клеточной культуре крысиной гепатомы (HTC) флуоресцентным методом с витальным красителем Nile Red и окрашиванием клеток красителем Oil Red O при их инкубации с жировой эмульсией - липофундином. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ-теста и окрашиванием с трипановым синим. Результаты. Культивирование клеточной культуры HTC с ахиллином и гемфиброзилом в концентрациях от 0,5 до 1,5 и от 0,25 до 0,5 ммоль соответственно приводило к дозозависимому уменьшению интенсивности флуоресценции Nile Red, что связано со снижением содержания липидов в клетках. В этих концентрациях препараты не оказывали цитотоксического действия, и жизнеспособность клеток НТС не изменялась по сравнению с соответствующим показателем контрольной культуры. Экспериментальную гиперлипидемию в культуре гепатомы индуцировали добавлением в инкубационную среду жировой эмульсии липофундина в конечной концентрации 0,05%. Интенсивность флуоресценции Nile Red в клетках возрастала в 4 раза ( p менее 0,05), что свидетельствует о существенном накоплении липидов в цитозоле клеток и подтверждается данными микроскопии после окрашивания нейтральных липидов в клетках красителем Oil Red O.В этих условиях ахиллин и гемфиброзил в концентрациях 0,5 и 0,25 ммоль соответственно снижали содержание липидов в клетках. Заключение. На модели гиперлипидемии, индуцированной липофундином, добавление сесквитерпенового γ-лактона ахиллина в инкубационную среду препятствует накоплению липидов в клетках НТС, о чем свидетельствует уменьшение флуоресценции Nile Red и снижение содержания окрашенных Oil Red O липидных капель в цитозоле. Для установления молекулярных мишеней действия ахиллина на метаболизм липидов в культуре НТС в дальнейшем необходимо исследование экспрессии генов ключевых ферментов липидного обмена.

Objective. Investigation of hypolipidemic effect of sesquiterpene γ-lactone ahillin in hepatoma tissue culture (HTC) cells. Material and methods. In this study we’ve evaluated the effect of γ-lactone sesquiterpene añhillin and gemfibrozil (comparator drug) on the lipid content in the hepatoma tissue culture (HTC) cell which were incubated with a fat emulsion lipofundin by fluorescent method with vital dye Nile Redand staining the cells with the dye Oil Red O. The cell viability was investigated using the MTT-test and staining with Trypan blue. Results. Cultivation cells HTC with añhillin and gemfibrozilat concentrations ranging from 0.5 to 1.5 mM and from 0.25 mM to 0.5 mM, respectively, resulted in dose-dependent decrease of the fluorescence’s intensity Nile Red. It reflects a decrease in lipid content in the cells. At these concentrations the drugs didn’t have cytotoxic effect and the cell viability didn’t change compared to the control culture. An experimental hyperlipidemia in the hepatoma culture cells was induced by adding to the incubation medium a fat emulsion lipofundin at a final concentration 0.05%. The intensity of fluorescence Nile Red in the cells was increased 4 fold (p less 0.05). This result suggests the significant accumulation of lipids in the cell’s cytosol and confirmed by microscopy after staining neutral lipids with the dye Oil Red O. Under these conditions añhillin and gemfibrozil reduced lipid content in cells and hadthe effect at concentrations of 0.5 mM and 0.25 mM respectively. Conclusion. In the lipofundin-mediated model of hyperlipidemia the sesquiterpene lactone añhillin prevents the lipid accumulation in cells. It confirms by decrease of fluorescence Nile Red and reduction lipid drops which were stained with Oil Red O in cytosol. To establish the molecular targets of añhillin’saction on lipid metabolism in cell culture HTC we need to investigate a gene expression of key enzymes of lipid metabolism.