Полиморфизм генов иммуносупрессорных цитокинов IL-10 и TGF-бета при туберкулезной инфекции

Abstract

Целью работы явилось исследование связи аллельного полиморфизма генов IL10 и TGFВ с изменениями базальной и BCG-индуцированной продукции соответствующих иммуносупрессорных цитокинов IL-10 и TGF-бета мононуклеарными лейкоцитами in vitro у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких (ТБ) в зависимости от клинической формы заболевания. Оценку продукции цитокинов осуществляли путем измерения их концентрации в культуральных супернатантах методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).Для исследования полиморфных участков генов цитокинов использовали аллельспецифичную амплификацию специфических участков генома. Материалом исследования являлись ДНК и супернатанты культуральных суспензий мононуклеарных лейкоцитов, выделенных из периферической венозной крови у здоровых добровольцев и больных ТБ. В ходе проведенных исследований выявлено, что базальная и BCG-индуцированная гиперпродукция IL-10 in vitro определяется при ТБ вне зависимости от генотипа локуса С-592А гена IL10. Наряду с этим у больных инфильтративным и диссеминированным ТБ генотип АА полиморфизма гена IL10 ассоциирован с максимальной, а генотип CC - с минимальной продукцией IL-10 in vitro. Анализ продукции TGF-бета in vitro у больных ТБ показал ее увеличение только в случае носительства аллеля Т(С-509Т) гена TGFB. При этом у больных диссеминированным ТБ с гомозиготным генотипом ТТ фиксировалось увеличение как базальной, так и BCG-индуцированной продукции TGF-бета, а у больных инфильтративным ТБ - только при индукции клеток антигеном BCG. Таким образом, гиперпродукция цитокинов с ингибирующей активностью у больных ТБ является генетически детерминированной и способствует формированию супрессорного режима иммунорегуляции. При этом выраженное увеличение секреции цитокинов IL-10 и TGF-бета in vitro у больных ТБ ассоциировано с носительством аллеля А и генотипа АА (С-592A ) гена IL10 и аллеля Т и генотипа ТТ (С-509Т) гена TGFB.

The aim of the work was the study of connection of allelic polymorphism of IL10 and TGFBgenes with changes in the basal and BCG-induced production of immunosuppressive cytokines IL-10 and TGF-beta by mononuclear leukocytes in vitro in patients with the first diagnosed pulmonary tuberculosis (TB), depending on the clinical form of the disease. The evaluation of the cytokines production was conducted by measuring its concentration in culture supernatants by ELISA. The allele-specific amplification of specific stretches of the genome was used for the study of polymorphic genes of cytokines. The DNA and supernatants of culture suspensions of blood mononuclear leucocytes in healthy volunteers and patients with TB were the material of the research. It was shown in the research conducted that the basal and BCG-induced over-production of IL-10 in vitro occurs in patients with TB, regardless of the genotype of the locus of C-592AIL10 gene. In addition, genotype A A of polymorphism of IL10 gene in patients with infiltrative and disseminated TB is associated with the maximum production of IL-10 in vitro and genotype CC - with the minimum production of this cytokine in vitro. Analysis of the production of TGF-beta in vitro in patients with TB showed its increase only in case of carriage of allele T (C-509T) of TGFB gene. In patients with disseminated TB and homosygotic genotype TT the increase in both basal and BCG-induced production of TGF-beta was determined, and in patients with infiltrative TB - only after induction of cells by BCG-antigen. Thus, the over-production of cytokines with inhibiting activity in patients with TB is genetically determined and promotes the formation of suppressive mode of immune-regulation. The increase in the secretion of cytokines IL-10 and TGF-beta in vitro in patients with TB are associated with carriage of allele A and genotype A A (C-592A) of IL10 gene and allele T and genotype TT (C-509T) of TGFB gene.